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商品屬性：

商品詳情：
生長特性 半貼半懸

細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣

凍存條件

凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養(yǎng)方案A（默認(rèn)）

生長培養(yǎng)基:

RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S

培養(yǎng)條件:

氣相：空氣，95%；CO2，5%, 溫度：37℃

推薦傳代比例 1:3-1:4

推薦換液頻率 2-3次/周

參考資料(來源文獻(xiàn))

背景描述 NCI-H446細(xì)胞是從一位小細(xì)胞肺癌患者的胸水中建立的，NCI-H446細(xì)胞的原始形態(tài)并不具有小細(xì)胞肺癌特征。NCI-H446細(xì)胞是小細(xì)胞肺癌的生化和形態(tài)學(xué)上的變種，表達(dá)神經(jīng)元有的烯醇酶和腦部肌酸激酶同功酶。NCI-H446細(xì)胞內(nèi)旋多巴脫羧酶、蠶素、抗利尿激素、催產(chǎn)素或胃泌激素釋放肽未達(dá)到可檢測水平。C-myc DNA序列擴增約20倍，c-myc RNA比正常細(xì)胞增加15倍。最初，傳代培養(yǎng)基用RPMI-1640(含5%胎牛血清、10nM氫化可的、0.005mg/ml胰島素、0.01mg/ml鐵傳遞蛋白、10nM 17-β-雌二醇、30nM亞硒)。

年齡（性別） 男性；61歲

組織來源 肺；轉(zhuǎn)移灶：肋膜滲出癌；小細(xì)胞肺癌

細(xì)胞類型 腫瘤細(xì)胞

腫瘤類型 肺癌細(xì)胞

生物安全等級 BSL-1

致瘤性 Yes, in nude mice (The cells form transplantable tumors with non-typical SCLC histology).

保藏機構(gòu) ATCC; HTB-171
細(xì)胞系培養(yǎng)步驟：

細(xì)胞系培養(yǎng)?的步驟主要包括細(xì)胞復(fù)蘇、細(xì)胞傳代和細(xì)胞凍存。

細(xì)胞復(fù)蘇?：

將凍存細(xì)胞從液氮中取出后，在37℃水浴鍋內(nèi)不斷搖動促進(jìn)其融化。

將融化的細(xì)胞移入離心管中，加入37℃預(yù)熱的DMEM培養(yǎng)基中（其中胎牛血清約為10%），輕輕吹勻，離心，500g離心2min，棄上清液。加入DMEM培養(yǎng)基清洗，棄上清液。加入DMEM培養(yǎng)基，輕輕吹打混勻，制成細(xì)胞懸液，接種于培養(yǎng)皿/瓶中，在含5% CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

細(xì)胞傳代?：

當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到80%~90%時，去掉培養(yǎng)基，用1X PBS清洗2次。

加入進(jìn)行消化，放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中約2-3min。

加入適量DME培養(yǎng)基終止消化，轉(zhuǎn)移至離心管后500g離心2min，棄上清液，再加入DMEM培養(yǎng)基清洗，棄上清液。加入DMEM培養(yǎng)基，輕輕吹打混勻，吸取10微升進(jìn)行計數(shù)，然后按照所需細(xì)胞量在含5% CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。

?細(xì)胞凍存?：

當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到80%~90%時，去掉培養(yǎng)基，用1X PBS清洗2次。

加入行消化，放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中約2-3min。

加入DMEM培養(yǎng)基終止消化，轉(zhuǎn)移至離心管后500g離心2min，棄上清液，再加入DMEM培養(yǎng)基清洗，棄上清液。

這些步驟確保了細(xì)胞的生長和繁殖能夠在體外環(huán)境中得到有效的維持和擴展，為科學(xué)研究提供了大量的細(xì)胞樣本?。

?細(xì)胞系培養(yǎng)?的步驟主要包括細(xì)胞復(fù)蘇、細(xì)胞傳代和細(xì)胞凍存。

細(xì)胞復(fù)蘇?：

將凍存細(xì)胞從液氮中取出后，在37℃水浴鍋內(nèi)不斷搖動促進(jìn)其融化。

將融化的細(xì)胞移入離心管中，加入37℃預(yù)熱的DMEM培養(yǎng)基中（其中胎牛血清約為10%），輕輕吹勻，離心，500g離心2min，棄上清液。加入DMEM培養(yǎng)基清洗，棄上清液。加入DMEM培養(yǎng)基，輕輕吹打混勻，制成細(xì)胞懸液，接種于培養(yǎng)皿/瓶中，在含5% CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

細(xì)胞傳代?：

當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到80%~90%時，去掉培養(yǎng)基，用1X PBS清洗2次。

加入進(jìn)行消化，放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中約2-3min。

加入適量DMEM培養(yǎng)基終止消化，轉(zhuǎn)移至離心管后500g離心2min，棄上清液，再加入DMEM培養(yǎng)基清洗，棄上清液。加入DMEM培養(yǎng)基，輕輕吹打混勻，吸取10微升進(jìn)行計數(shù)，然后按照所需細(xì)胞量在含5% CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。

細(xì)胞凍存?：

當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到80%~90%時，去掉培養(yǎng)基，用1X PBS清洗2次。

加入進(jìn)行消化，放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中約2-3min。

加入DMEM培養(yǎng)基終止消化，轉(zhuǎn)移至離心管后500g離心2min，棄上清液，再加入DMEM培養(yǎng)基清洗，棄上清液。

這些步驟確保了細(xì)胞的生長和繁殖能夠在體外環(huán)境中得到有效的維持和擴展，為科學(xué)研究提供了大量的細(xì)胞樣本?

細(xì)胞接收后的處理：

1）NCI-H446人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞收到細(xì)胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。

2）請在4或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)

3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上，可以對細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細(xì)胞需要離心回收。

4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。  收到細(xì)胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。                      

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

公司正在出售的產(chǎn)品：